Resistencia a Terapias en Cáncer de Ovario: Guía Esencial
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Pregunta: ¿Cómo se cuantificaron las proteínas celulares después del lavado con PBS y tratamiento con NaOH 1N?
Respuesta: Se midieron por el método de Lowry registrando la absorbancia a 750 nm y calculando las concentraciones a partir de una curva estándar de BSA.
Pregunta: ¿Qué paso se realizó antes de medir proteínas para lisar las células?
Respuesta: Las células se lavaron 3 veces con PBS y se mantuvieron en NaOH 1N durante una noche.
Pregunta: ¿Cómo se prepararon las monocapas celulares para el ensayo de migración en herida?
Respuesta: Se sembraron en placas de 6 pozos en medio con suero y se dejaron alcanzar ~80% de confluencia.
Pregunta: ¿Con qué instrumento se hizo la herida en el ensayo de migración y qué se hizo inmediatamente después?
Respuesta: Se realizó la herida con un tip de 200 μl; luego se reemplazó el medio para eliminar las células levantadas y se incubó 24 h.
Pregunta: ¿Cómo se fijaron y tiñeron las células tras el ensayo de migración en herida?
Respuesta: Se fijaron con paraformaldehído 4% y se tiñeron con solución acuosa de cristal violeta 1% durante 20 min, se lavó con agua destilada y se dejó secar.
Pregunta: ¿Qué se midió para calcular el índice de migración (IM) en el ensayo de herida?
Respuesta: Se midió el ancho de la herida (distancia entre los dos frentes de migración) al tiempo 0 h y a 24 h, y se calculó IM = (herida_0h − herida_24h) / her
Pregunta: ¿Qué tinción se empleó para analizar la morfología celular tras fijación?
Respuesta: Azul de Toluidina al 0,5% en solución acuosa durante 3 min, seguido de lavado con agua destilada y montaje en Bálsamo de Canadá.
Pregunta: ¿Cuál fue el procedimiento general de fijación antes de tinción con azul de Toluidina o inmunofluorescencia?
Respuesta: Fijación con paraformaldehído al 4% siguiendo el mismo protocolo previo.
Pregunta: ¿Cómo se permeabilizaron las células para los ensayos de inmunofluorescencia?
Respuesta: Con Tritón X-100 al 0,1% durante 20 min.
Pregunta: ¿Cómo se detectó la F-actina en inmunofluorescencia?
Respuesta: Se incubaron las células con TRITC-Faloidina (1:100 de 1 mg/ml en 0,1% BSA) durante 15 min a 37°C en cámara húmeda y luego se lavó con PBS.