Resumen de Genética: Conceptos y Métodos de Estudio
Genética: Conceptos Clave y Métodos de Estudio Esenciales
Introducción
Las pruebas genéticas moleculares permiten identificar alteraciones en el ADN que causan o predisponen a enfermedades. Este material se enfoca en técnicas moleculares (excluye Genética clínica, Citogenética y Microarreglos). Veremos principios, aplicaciones clínicas, ventajas, limitaciones y ejemplos prácticos para elegir la prueba adecuada según la sospecha clínica.
Definición: Las pruebas genéticas moleculares son métodos que analizan la secuencia o el número de copias del ADN para detectar variantes patogénicas, deleciones/duplicaciones y alteraciones de metilación en regiones específicas o en todo el genoma codificante.
Tipos principales de pruebas moleculares
1) Secuenciación Sanger
- ¿Qué analiza? La secuenciación de un solo gen o de regiones específicas.
- ¿Cuándo usarla?
- Confirmación de una variante identificada por otra técnica.
- Estudio de familiares para segregación de una variante.
- Sospecha clínica muy dirigida a un gen concreto.
- Ventajas:
- Alta precisión en la región analizada.
- Buena para variantes puntuales y pequeñas inserciones/deleciones.
- Limitaciones:
- No es práctica para grandes paneles o exomas completos.
Definición: La secuenciación Sanger es un método de secuenciación capilar que determina la secuencia nucleotídica de fragmentos de ADN individuales con alta fidelidad.
2) Paneles de genes (NGS dirigido)
- ¿Qué analiza? Un conjunto de genes relacionados con un fenotipo o enfermedad específica.
- Características:
- Mayor profundidad de cobertura por gen que exoma/genoma.
- Coste y análisis más focalizado.
- Ventajas:
- Mejora la probabilidad de detectar variantes en genes candidatos.
- Menos datos que interpretar que en WES/WGS.
- Limitaciones:
- No detecta variantes en genes que no están incluidos en el panel.
Definición: Un panel de genes es una prueba basada en NGS que secuencia de manera simultánea un grupo seleccionado de genes asociados a una patología o grupo de fenotipos.
3) Secuenciación del exoma completo (WES)
- ¿Qué analiza? Todas las regiones codificantes (exones) de aproximadamente $20{,}000$ genes, que constituyen cerca de $1\text{–}2%$ del ADN total.
- Ventajas:
- Detecta variantes puntuales y pequeñas indels en la mayoría de genes codificantes.
- Buena para diagnósticos cuando la etiología genética es heterogénea.
- Limitaciones:
- No cubre bien regiones no codificantes ni algunos exones con baja cobertura.
- Puede no detectar ciertas variantes estructurales o variantes con cobertura insuficiente.
Definición: WES (whole-exome sequencing) es la secuenciación masiva dirigida a todos los exones humanos para identificar variantes en regiones codificantes.
4) Secuenciación del genoma completo (WGS)
- ¿Qué analiza? Todo el ADN (regiones codificantes y no codificantes), incluyendo regiones reguladoras y variantes estructurales.
- Ventajas:
- Mayor capacidad para detectar variantes estructurales complejas y variación en regiones no codificantes.
- Cobertura más uniforme que WES en muchos loci.
- Limitaciones:
- Mayor coste y carga analítica.
- Genera más hallazgos incidentales y variantes de significado incierto.
Definición: WGS (whole-genome sequencing) es la secuenciación de todo el genoma humano para identificar variantes en regiones codificantes y no codificantes.
5) MLPA (Multiplex ligation-dependent probe amplification)
- ¿Qué analiza? Delecciones y duplicaciones (CNV) en genes o regiones específicas; MS-MLPA permite evaluar trastornos por metilación.
- Aplicaciones:
- Confirmación de CNV en genes de interés detectados por otros métodos.
- Diagnóstico de síndromes por alteraciones de número de copias o metilación.
- Limitaciones:
- Técnica dirigida: solo detecta las regiones para las que hay sondas diseñadas.
- No detecta alteraciones balanceadas como translocaciones equilibradas.
Definición: MLPA es una técnica de hibridación y amplificación que cu
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Pruebas genéticas moleculares
Klíčové pojmy: Secuenciación Sanger: ideal para un gen específico y confirmación de variantes, Paneles NGS: secuencian grupos de genes relacionados con un fenotipo específico, WES: analiza exones de ~$20{,}000$ genes, útil en etiologías heterogéneas, WGS: cubre todo el genoma, mejor para variantes estructurales y no codificantes, MLPA: detecta CNV y alteraciones de metilación en regiones dirigidas, Confirmar hallazgos relevantes con técnicas alternativas (ej. Sanger), Elegir prueba según sospecha clínica: gen único → Sanger; múltiples genes → panel/WES; variantes complejas → WGS, Limitaciones comunes: cobertura incompleta, detección limitada de estructuras complejas y aparición de VUS, Para CNV detectadas por NGS, confirmar con MLPA u otro método dirigido, Informar al paciente sobre limitaciones y considerar asesoría genética antes/después