Resumo de Genética: Conceitos e Métodos de Estudo

## Introdução Os testes genéticos moleculares permitem identificar alterações no DNA que causam ou predispõem a doenças. Este material foca em técnicas moleculares (exclui Genética Clínica, Citogenética e Microarranjos). Veremos princípios, aplicações clínicas, vantagens, limitações e exemplos práticos para escolher o teste adequado de acordo com a suspeita clínica. > **Definição:** Os testes genéticos moleculares são métodos que analisam a sequência ou o número de cópias do DNA para detectar variantes patogênicas, deleções/duplicações e alterações de metilação em regiões específicas ou em todo o genoma codificante. ## Principais Tipos de Testes Moleculares ### 1) Sequenciamento Sanger - O que analisa? O sequenciamento de um único gene ou de regiões específicas. - Quando usar? - Confirmação de uma variante identificada por outra técnica. - Estudo de familiares para segregação de uma variante. - Suspeita clínica muito direcionada a um gene específico. - Vantagens: - Alta precisão na região analisada. - Bom para variantes pontuais e pequenas inserções/deleções. - Limitações: - Não é prático para grandes painéis ou exomas completos. > **Definição:** O sequenciamento Sanger é um método de sequenciamento capilar que determina a sequência nucleotídica de fragmentos de DNA individuais com alta fidelidade. ### 2) Painéis de Genes (NGS Direcionado) - O que analisa? Um conjunto de genes relacionados a um fenótipo ou doença específica. - Características: - Maior profundidade de cobertura por gene do que exoma/genoma. - Custo e análise mais focados. - Vantagens: - Melhora a probabilidade de detectar variantes em genes candidatos. - Menos dados para interpretar do que em WES/WGS. - Limitações: - Não detecta variantes em genes que não estão incluídos no painel. > **Definição:** Um painel de genes é um teste baseado em NGS que sequencia simultaneamente um grupo selecionado de genes associados a uma patologia ou grupo de fenótipos. ### 3) Sequenciamento do Exoma Completo (WES) - O que analisa? Todas as regiões codificadoras (éxons) de aproximadamente $20{,}000$ genes, que constituem cerca de $1\text{–}2\%$ do DNA total. - Vantagens: - Detecta variantes pontuais e pequenas indels na maioria dos genes codificadores. - Bom para diagnósticos quando a etiologia genética é heterogênea. - Limitações: - Não cobre bem regiões não codificadoras nem alguns éxons com baixa cobertura. - Pode não detectar certas variantes estruturais ou variantes com cobertura insuficiente. > **Definição:** WES (whole-exome sequencing) é o sequenciamento massivo direcionado a todos os éxons humanos para identificar variantes em regiões codificadoras. ### 4) Sequenciamento do Genoma Completo (WGS) - O que analisa? Todo o DNA (regiões codificadoras e não codificadoras), incluindo regiões reguladoras e variantes estruturais. - Vantagens: - Maior capacidade para detectar variantes estruturais complexas e variação em regiões não codificadoras. - Cobertura mais uniforme do que WES em muitos loci. - Limitações: - Maior custo e carga analítica. - Gera mais achados incidentais e variantes de significado incerto. > **Definição:** WGS (whole-genome sequencing) é o sequenciamento de todo o genoma humano para identificar variantes em regiões codificadoras e não codificadoras. ### 5) MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) - O que analisa? Deleções e duplicações (CNV) em genes ou regiões específicas; MS-MLPA permite avaliar transtornos por metilação. - Aplicações: - Confirmação de CNV em genes de interesse detectados por outros métodos. - Diagnóstico de síndromes por alterações de número de cópias ou metilação. - Limitações: - Técnica direcionada: só detecta as regiões para as quais há sondas desenhadas. - Não detecta alterações balanceadas como translocações equilibradas. > **Definição:** MLPA é uma técnica de hibridização e amplificação que quantifica o número de cópias de regiões específicas do DNA por meio de