Flashcards de Cinética Enzimática: Curva de Progresso e Prática
Cinética Enzimática: Curva de Progresso e Guia Prático Completo
Toque para virar · Deslize para navegar
Ensaio enzimático e medição de fosfato
15 cartões
Cartão 1
Pergunta: Qual o volume e a composição do Meio de Incubação (MI) de acordo com o procedimento?
Resposta: Preparam-se 30 ml no total: 15 ml de tampão de reação e 15 ml de substrato em um béquer.
Cartão 2
Pergunta: Como a reação é iniciada no ensaio enzimático descrito?
Resposta: É iniciada imediatamente ao adicionar 25 µl da enzima FA ao MI no banho termostatizado e o cronômetro é acionado.
Cartão 3
Pergunta: O que deve ser feito ao final de cada tempo de incubação?
Resposta: Retirar 2 ml da reação, adicioná-los ao tubo STOP correspondente que contém 2 ml de molibdato de amônio, agitar em vórtex e guardar em temperatura amb
Cartão 4
Pergunta: O que cada tubo STOP contém e como devem ser preparados antes da reação?
Resposta: Cada tubo STOP contém 2 ml de molibdato de amônio; devem ser tubos Falcon devidamente rotulados e mantidos tampados antes do uso.
Cartão 5
Pergunta: O que é adicionado aos tubos STOP ao finalizar o ensaio enzimático para realizar a reação colorimétrica e quais os passos seguintes?
Resposta: Adicionam-se 400 µl de solução redutora a cada tubo STOP, agita-se bem, aguarda-se 15 minutos e mede-se a absorbância a 660 nm contra um branco.
Cartão 6
Pergunta: Qual a composição do tubo branco e do tubo padrão de acordo com o protocolo?
Resposta: Branco: 2 ml molibdato de amônio + 400 µl solução redutora + 2 ml água destilada. Padrão: 2 ml molibdato de amônio + 400 µl solução redutora + 1,5 ml
Cartão 7
Pergunta: Para que o tubo padrão é utilizado neste ensaio?
Resposta: Para conhecer a absorbância correspondente a uma quantidade conhecida de Pi adicionada e, assim, calcular por regra de três a quantidade de Pi present
Cartão 8
Pergunta: Como a quantidade de moles de Pi gerados em cada tubo STOP é calculada?
Resposta: Usando a absorbância do tubo padrão e a quantidade de moles de Pi que ele contém, aplicar regra de três simples para converter a absorbância de cada a
Cartão 9
Pergunta: Qual gráfico deve ser representado ao final do ensaio e o que é determinado com ele?
Resposta: Grafica-se Pi (µmol) vs tempo e determina-se a velocidade inicial da reação, que é a inclinação na faixa linear da curva.
Cartão 10
Pergunta: Por que um tubo branco é incluído na medição de absorbância?
Resposta: Para usá-lo como referência no espectrofotômetro e subtrair a absorbância de reagentes/veículo, permitindo medir apenas o sinal do complexo colorido.