Hibridación de Ácidos Nucleicos y Sondas: Guía Completa
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Pregunta: ¿Por qué es fundamental marcar una sonda en un proceso de hibridación de ácidos nucleicos?
Respuesta: Para visualizar el lugar donde ocurre la hibridación e identificar el fragmento de material genético objeto de estudio.
Pregunta: ¿Cómo se realiza habitualmente el marcaje de una sonda en vitro?
Respuesta: De manera artificial con una ADN polimerasa que añade nucleótidos marcados en los grupos fosfato de la sonda.
Pregunta: ¿Cuáles son las dos grandes familias de sondas según su modo de revelado?
Respuesta: Sondas marcadas radiactivamente y sondas no radiactivas.
Pregunta: Menciona cuatro isotopos radiactivos usados como marcadores.
Respuesta: Fósforo-32 (32P), fósforo-33 (33P), tritio (3H) y azufre-35 (35S).
Pregunta: Cita cuatro ejemplos de marcadores no radiactivos utilizados para sondas.
Respuesta: Peroxidasa, fosfatasa alcalina, luminol y biotina.
Pregunta: Compara sensibilidad y contaminación entre sondas radiactivas y no radiactivas.
Respuesta: Las radiactivas son muy sensibles pero altamente contaminantes; las no radiactivas son menos sensibles (menor señal) y no contaminantes.
Pregunta: ¿De qué depende la señal de una sonda radiactiva y cómo difiere de las no radiactivas?
Respuesta: La señal de una sonda radiactiva depende de la vida media del isótopo; las no radiactivas tienen señales variables que pueden ser puntuales o mantenid
Pregunta: Define actividad específica en el contexto de marcaje de sondas.
Respuesta: Es el número de isótopos incorporados en relación con la masa total de la sonda; valora la calidad y efectividad del marcaje.
Pregunta: Nombra tres métodos para incorporar nucleótidos marcados en sondas.
Respuesta: Nick translation (translocación de mellas), random priming (marcaje por cebador al azar) y end-labeling (marcaje en los extremos).
Pregunta: ¿Qué es y para qué sirve la técnica nick translation?
Respuesta: Es la técnica de marcaje por translocación de mellas que copia una cadena de ADN incorporando nucleótidos marcados en lugar de normales para generar u