Tarjetas de Cinética Enzimática: Curva de Progreso y Práctica
Cinética Enzimática: Curva de Progreso y Práctica Guía Completa
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Ensayo enzimático y medición de fosfato
15 tarjetas
Tarjeta 1
Pregunta: ¿Cuál es el volumen y composición del Medio de Incubación (MI) según el procedimiento?
Respuesta: Se preparan 30 ml en total: 15 ml de buffer de reacción y 15 ml de sustrato en un vaso de precipitado.
Tarjeta 2
Pregunta: ¿Cómo se inicia la reacción en el ensayo enzimático descrito?
Respuesta: Se inicia inmediatamente al agregar 25 µl de enzima FA al MI en el baño termorregulado y se comienza a cronometar.
Tarjeta 3
Pregunta: ¿Qué se debe hacer al cumplirse cada tiempo de incubación?
Respuesta: Tomar 2 ml de la reacción, añadirlos al tubo STOP correspondiente que contiene 2 ml de molibdato de amonio, agitar con vortex y guardar a temperatura
Tarjeta 4
Pregunta: ¿Qué contiene cada tubo STOP y cómo deben estar preparados antes de la reacción?
Respuesta: Cada tubo STOP contiene 2 ml de molibdato de amonio; deben ser tubos Falcon debidamente rotulados y mantenerlos tapados antes del uso.
Tarjeta 5
Pregunta: ¿Qué se añade a los tubos STOP al finalizar el ensayo enzimático para realizar la reacción colorimétrica y qué pasos siguen?
Respuesta: Se agregan 400 µl de solución reductora a cada tubo STOP, se agita bien, se espera 15 minutos y se mide la absorbancia a 660 nm contra un blanco.
Tarjeta 6
Pregunta: ¿Cuál es la composición del tubo blanco y del tubo patrón según el protocolo?
Respuesta: Blanco: 2 ml molibdato de amonio + 400 µl solución reductora + 2 ml agua destilada. Patrón: 2 ml molibdato de amonio + 400 µl solución reductora + 1,5
Tarjeta 7
Pregunta: ¿Para qué se utiliza el tubo patrón en este ensayo?
Respuesta: Para conocer la absorbancia correspondiente a una cantidad conocida de Pi agregada y así calcular mediante regla de tres la cantidad de Pi presente en
Tarjeta 8
Pregunta: ¿Cómo se calcula la cantidad de moles de Pi generados en cada tubo STOP?
Respuesta: Usando la absorbancia del tubo patrón y la cantidad de moles de Pi que contiene, aplicar regla de tres simple para convertir la absorbancia de cada mu
Tarjeta 9
Pregunta: ¿Qué gráfico se debe representar al terminar el ensayo y qué se determina con él?
Respuesta: Se grafica Pi (µmol) vs tiempo y se determina la velocidad inicial de la reacción, que es la pendiente en el rango lineal de la curva.
Tarjeta 10
Pregunta: ¿Por qué se incluye un tubo blanco en la medición de absorbancia?
Respuesta: Para usarlo como referencia en el espectrofotómetro y restar la absorbancia de reactivos/vehículo, permitiendo medir sólo la señal del complejo colore