Zhrnutie na Laboratórne metódy vyšetrenia imunity
Laboratórne Metódy Vyšetrenia Imunity: Kompletný Prehľad
Komplementový systém a imunitné testy
Úvod
Komplementový systém je súčasťou nešpecifickej humorálnej imunity, ktorá podporuje elimináciu patogénov, imunokomplexov a poškodených buniek. Laboratórne testy komplementu pomáhajú diagnostikovať choroby spojené s jeho zmenami (znížená alebo zvýšená aktivita) a identifikovať vrodené defekty zložiek komplementu.
Definícia: Komplementový systém je súbor plazmatických bielkovín, ktoré sa aktivujú kaskádovito a vedú k opsonizácii, zápalu a lýze cieľových buniek.
Rozdelenie tém
- Indikácie vyšetrenia komplementu
- Metódy stanovenia zložiek komplementu
- Meranie funkčnej aktivity: CH50 a AH50
- Stanovenie lyzozýmu
- Praktické príklady a aplikácie
1) Indikácie vyšetrenia komplementu
- podozrenie na ochorenia s tvorbou imunokomplexov (napr. systémový lupus erythematosus – SLE, sérová choroba, subakútna bakteriálna endokarditída) kde dochádza k zníženiu hladín komplementu
- membránoproliferatívna glomerulonefritída
- choroby pečene (syntetická porucha proteínov komplementu)
- ochorenia spojené s vrodenými defektmi komplementových zložiek (napr. hereditárny angioneurotický edém – HANE)
- akútne zápalové stavy
Poznámka: Deficit komplementu môže byť primárny (vrodený) alebo sekundárny (spotreba pri chorobe alebo znížená syntéza).
2) Metódy stanovenia zložiek komplementu
Základný princíp imunochemických metód
Roztok antigénu (Ag) a protilátky (Ab) tvorí komplexy, ktoré spôsobujú zákal. Množstvo zákalu meráme turbidimetricky alebo nefelometricky.
- Turbidimetria: meria intenzitu svetla, ktoré prechádza priamo cez roztok (spektrofotometria).
- Nefelometria: meria intenzitu rozptýleného svetla; detektory umiestnené pri uhloch 45° a 90°.
Používané metódy a čo merajú
| Metóda | Meraná zložka / poznámka |
|---|---|
| Radiálna imunodifúzia | všetky zložky a faktory C (okrem faktora D, ktorý býva nízky v sére) — precipitačná metóda |
| Nefelometria | stanovenie C3, C4, D |
| RIA, prietoková cytometria | stanovenie fragmentov C3a, C4a, C5a |
| ELISA | stanovenie mannózviažuceho lektínu (MBL) |
Tip: Pri nefelometrii sú detektory umiestnené tak, aby zachytili rozptýlené svetlo, čo zvyšuje citlivosť pri nízkych koncentráciách.
3) Meranie funkčnej aktivity komplementu
Aktivácia klasickou cestou — radiálna hemolýza
Princíp: Komplement sa aktivuje hemolytickým systémom (HS) pozostávajúcim z ovčích erytrocytov (OERY) opsonizovaných protilátkou (amboceptor – Am). Aktivovaný komplement spôsobí lýzu OERY-Am; rozsah lýzy závisí na množstve funkčného komplementu.
CH50 — hemolytická jednotka 50
- CH50 je množstvo séra, ktoré spôsobí lýzu 50 % OERY-Am.
- Vzorky sa riedia v sérii riedení a spektrofotometricky sa stanoví hemolýza.
- Z výsledkov sa vypočíta množstvo komplementu v hemolytických jednotkách.
- Referenčná hodnota: $37{,}5 \pm 4$ CH50/ml
Alternatívna cesta — AH50
- AH50 je množstvo komplementu, ktoré spôsobí lýzu 50 % králičích alebo morčacích erytrocytov za štandardných podmienok.
- Referenčná hodnota: $16\text{–}22$ AH50/ml
Poznámka: Rozdiel medzi CH50 a AH50 je v spúšťacej aktivácii: klasická cesta vyžaduje Ag+Ab, alternatívna cesta sa môže aktivovať priamo na mikroorganizmoch bez protilátok.
4) Stanovenie lyzozýmu
Princíp: Lyzozým degraduje bunkové steny niektorých baktérií, čím sa znižuje zákal bakteriálnej suspenzie; pokles zákalu je úmerný množstvu lyzozýmu vo vzorke.
- Meranie je fotometrické (spektrofotometria) s použitím kalibračnej krivky.
- Vzorky sa štandardizujú na substráte baktérií Micrococcus lysodeikticus.
- Priemerné hodnoty lyzozýmu v sére: $17{,}9 \pm 3{,}9$ mg/l.
5) Praktické príklady a klinické aplikácie
- SLE: často nájdete znížené hladiny C3 a C4 a znížený CH50 v dôsledku spotreby komplementu pri imunokomplexom sprostredkovanom poškodení.
- Membránoproliferatívna glomerulonefritída: znížené hladiny niektorých komplementových komponentov, indikujúce aktívny zápal v glomerule.
- HANE (hereditár
Zaregistruj sa pre celé zhrnutieUž máš účet? Prihlásiť sa
Komplementový systém
Klíčová slova: Komplementový systém a imunitné testy
Klíčové pojmy: Komplement je súbor plazmatických bielkovín aktivovaných kaskádovito, Indikácie: SLE, membránoproliferatívna GN, choroby pečene, HANE, Imunochemické metódy: radiálna imunodifúzia, nefelometria, ELISA, RIA, Turbidimetria meria prechádzajúce svetlo, nefelometria rozptýlené svetlo, CH50 = množstvo séra, ktoré lýzuje 50% OERY-Am; ref $37{,}5 \pm 4$ CH50/ml, AH50 hodnotí alternatívnu cestu; ref $16\text{–}22$ AH50/ml, Lyzozým meraný fotometricky s Micrococcus lysodeikticus; ref $17{,}9 \pm 3{,}9$ mg/l, Deficit komplementu môže byť primárny alebo sekundárny, Fragmenty C3a, C4a, C5a sa merajú RIA alebo prietokovou cytometriou, MBL sa stanovuje pomocou ELISA