Técnicas de Microscopía y Diagnóstico Clínico Esencial
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Pregunta: ¿Cuál es el propósito de la fijación primaria con glutaraldehído en la preparación de muestras para microscopía electrónica?
Respuesta: Estabilizar proteínas y estructuras de membranas mediante entrecruzamiento covalente, preservando la morfología celular cercana al estado fisiológico.
Pregunta: ¿Con qué grupos químicos reacciona el glutaraldehído?
Respuesta: Con grupos amino de proteínas y fosfolípidos.
Pregunta: ¿Cuál es la concentración óptima y condiciones generales para la fijación con glutaraldehído?
Respuesta: Entre 2.5–4% en buffer fosfato o cacodilato a pH 7.2–7.4; incubación de 1–4 horas a temperatura ambiente o a 4°C por períodos prolongados.
Pregunta: ¿Qué objetivo tiene la post‑fijación con tetróxido de osmio (OsO4)?
Respuesta: Complementar la fijación primaria estabilizando membranas lipídicas y proporcionando contraste electrónico.
Pregunta: ¿A qué componentes se une preferentemente el osmio y qué efecto produce en la imagen electrónica?
Respuesta: Se une a dobles enlaces de ácidos grasos insaturados y grupos sulfhidrilo, generando depósitos metálicos densos que aparecen oscuros en las imágenes.
Pregunta: ¿Qué concentraciones y tiempos son típicos para la post‑fijación con osmio?
Respuesta: Concentraciones entre 1–2% durante 1–2 horas; requiere manipulación en campana extractora por su toxicidad.
Pregunta: ¿Cuál es el propósito de la deshidratación en la preparación de muestras?
Respuesta: Eliminar progresivamente el agua tisular mediante series graduales de solventes orgánicos para evitar daños durante la inclusión.
Pregunta: ¿Qué solventes y serie de concentraciones se usan habitualmente en la deshidratación?
Respuesta: Típicamente etanol o acetona en concentraciones crecientes desde 30% hasta 100%.
Pregunta: ¿Cuánto tiempo se recomienda mantener la muestra en cada paso de deshidratación y por qué?
Respuesta: Generalmente 10–15 minutos por concentración para permitir tiempos de equilibrio adecuados y evitar daños osmóticos.
Pregunta: ¿Qué artefactos causa una deshidratación incompleta y qué ocurre con la deshidratación excesiva?
Respuesta: La deshidratación incompleta genera artefactos de cristalización durante la inclusión; la deshidratación excesiva causa contracción tisular y pérdida