Resumen de Morfología Celular y Experimentos Clave
Morfología Celular y Experimentos Clave para Estudiantes
Introducción
La microbiología y las técnicas de laboratorio de biología celular incluyen métodos para observar, identificar y manipular células y sus orgánulos mediante preparaciones microscópicas, coloraciones y procedimientos de cultivo. Este material resume prácticas comunes: cortes histológicos, frotis sanguíneos, observación de orgánulos vegetales, cromatografía de pigmentos y preparación de cultivos celulares para análisis citogenético.
Definición: La biología celular experimental es el conjunto de técnicas y procedimientos de laboratorio destinados a visualizar y analizar la estructura, función y dinámica de células y orgánulos.
Preparaciones y observaciones microscópicas: tipos y objetivos
1. Cortes histológicos y tejidos
- Objetivo: observar arquitectura tisular y orgánulos (p. ej. hepatocitos, fibras musculares).
- Ejemplos del contenido:
- Corte de hígado de rata: hepatocitos binucleados con nucléolos prominentes.
- Corte de músculo esquelético de rata: fibras estriadas y células polinucleadas.
Definición: Corte histológico es una sección delgada de tejido fijado y teñido para su observación al microscopio óptico.
Procedimiento general:
- Fijación (p. ej. formalina) para conservar estructura.
- Inclusión en parafina y corte con microtomo.
- Montaje en porta y tinción (hematoxilina-eosina u otras específicas).
2. Frotis de sangre
- Objetivo: evaluar morfología de eritrocitos y leucocitos.
- Preparaciones mencionadas:
- Frotis de sangre humana: observar glóbulos rojos (anucleados), glóbulos blancos (formas nucleares diversas).
- Frotis de sangre de sapo: comparar morfología y tinciones con sangre humana (anfibios suelen tener eritrocitos nucleados).
Técnica rápida:
- Extender gota de sangre en porta, secar al aire, fijar (metanol) y teñir (Giemsa o Wright).
3. Preparaciones de órganos y ápices de raíz (mitosis)
- Corte longitudinal de ápice de raíz de cebolla (Allium cepa): tinción con hematoxilina para visualizar células en interfase y las diferentes fases de mitosis.
- Aplastado de ápice de raíz de haba (Vicia faba): tinción con fucsina para observar interfase y etapas mitóticas.
Procedimiento clave:
- Recolección de ápices, prefijación si es necesario.
- Fijación, hidrólisis leve si requiere sacar cromatina.
- Tinción (hematoxilina, fucsina), montaje y observación.
4. Suspensión de linfocitos en cultivo para cariotipos
- Objetivo: obtener metafases y cromosomas para análisis citogenético.
- Protocolo resumido (según contenido):
- Cultivar sangre periférica 72 h a 37 °C con mitógeno para estimular división de linfoblastos.
- Añadir colchicina durante las 2 h finales para detener mitosis en metafase.
- Tratamiento hipotónico para hinchar células y dispersar cromosomas.
- Fijación con metanol-acético y extensión en porta.
- Tinción con Giemsa y observación de núcleos interfásicos y metafásicos.
Definición: Colchicina es un agente que inhibe la polimerización de microtúbulos, deteniendo las células en metafase y facilitando la visualización cromosómica.
Observación de orgánulos vegetales y exclusión de colorantes
1. Ejemplos y qué observar
- Corte de Spirogyra (alga filamentosa): cloroplastos en forma de cinta (espirales típicos).
- Amiloplastos en tubérculos de papa: observar gránulos de almidón; contraste con y sin lugol para confirmar la presencia de almidón.
- Células vegetales (elodea, cebolla): respuesta a medios hipotónicos (turgencia) y a medios hipertónicos (plasmólisis).
Técnica de extracción de amiloplastos:
- Raspado de tejido con espátula, montaje directo y tinción con lugol para evidenciar almidón (oscurecimiento azul/negro).
2. Exclusión de azul de tripán
- Propósito: distinguir células vivas de muertas (azul penetra cél
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Técnicas de laboratorio celular
Klíčové pojmy: Preparar cortes histológicos requiere fijación, inclusión, corte y tinción., Frotis sanguíneo: secar, fijar (metanol) y teñir (Giemsa/Wright) para evaluar eritrocitos y leucocitos., Colchicina detiene mitosis en metafase facilitando análisis cromosómico., Azul de tripán distingue células vivas (incoloras) de muertas (azules)., Lugol tiñe almidón de color azul/negro; útil para amiloplastos en tubérculos., En cromatografía, pigmentos más apolares (β-caroteno) migran más con hexano., Cebolla y haba son modelos clásicos para observar fases de mitosis., Registrar tiempos críticos: cultivo 72 h, colchicina 2 h, tratamiento hipotónico antes de fijar.