Resumen de Cultivo Celular: Fundamentos y Aplicaciones

## Introducción El cultivo celular es la técnica que permite mantener y multiplicar células fuera del organismo (in vitro) en condiciones controladas. Permite estudiar fisiología celular, efectos de factores externos y realizar prácticas experimentales sin usar un organismo completo. En este material encontrarás los fundamentos, componentes del medio, tipos de cultivos, la biología básica del crecimiento celular y pasos generales de trabajo. > **Definición:** Medio de cultivo: Solución en forma sólida o líquida que contiene los nutrientes necesarios para permitir el crecimiento de uno o varios tipos celulares. ## 1. Conceptos básicos y términos clave - **Proliferación celular:** Aumento del número de células por crecimiento y división. Relacionada con disponibilidad de nutrientes. - **Senescencia:** Pérdida de funciones y eventual muerte celular por envejecimiento replicativo. - **Apoptosis:** Muerte celular programada, regulada genéticamente. - **Inhibición por contacto:** Parada del crecimiento cuando las células en monocapa se encuentran y ocupan todo el espacio disponible. - **Línea celular:** Población de células derivada de un cultivo primario que puede repetidamente subcultivarse. > **Definición:** Telómeros: Regiones de ADN no codificantes en los extremos de los cromosomas que contribuyen a la estabilidad cromosómica y marcan el límite de replicaciones por acortamiento progresivo. Did you know que la criopreservación permite conservar cultivos indefinidamente al reducir casi a cero la actividad metabólica, aunque el congelado debe realizarse de forma gradual para evitar formación de hielo intracelular? ## 2. Medios de cultivo: componentes y propiedades fisicoquímicas ### Componentes principales - Soluciones salinas equilibradas: NaCl, KCl, NaHCO3, CaCl2, MgCl2, etc. - Aminoácidos: arginina, cisteína, glutamato, leucina, metionina. - Vitaminas: biotina, riboflavina (factores limitantes). - Glucosa: fuente de energía. - Hormonas y factores de crecimiento. - Inhibidores de contaminantes: antibióticos y antimicóticos (uso controlado). - Suero fetal bovino: contiene factores necesarios para proliferación. - Solución tampón: bicarbonato sódico (carbonato-bicarbonato). - Indicador de pH: rojo fenol. > **Definición:** Medio tampón: solución que mantiene el pH estable ante cambios por actividad metabólica celular. ### Propiedades fisicoquímicas críticas - Concentración de oxígeno: normalmente se usa la atmosférica ($21\%$), aunque algunos cultivos requieren mayor saturación. - Dióxido de carbono: típicamente alrededor del $5\%$ para mantener pH mediante el sistema carbonato-bicarbonato. - Temperatura: dependerá del origen de las células; las humanas se mantienen típicamente a $37^{\circ}\mathrm{C}$; temperaturas por encima de la corporal suelen ser letales. - pH: pH fisiológico ideal $=7.4$; uso de tampones y del indicador rojo fenol. - Osmolaridad: medios ligeramente hipotónicos compensan la pérdida de agua por evaporación, favoreciendo que el agua entre a las células por ósmosis y mantenga hidratación. Tabla comparativa: recipientes | Característica | Vidrio | Plástico | |---|---:|---:| | Esterilización | Fácil | Desechable (no reutilizable) | | Observación microscópica | Buena | Buena (alta calidad óptica) | | Costo | Relativamente bajo | Muy bajo por unidad | | Uso común | Frascos, botellas | Placas Petri, placas de cultivo | Fun fact: En muchos laboratorios la placa de Petri de plástico es el soporte más usado por su bajo coste y su facilidad de manejo en cultivos celulares. ## 3. Tipos de cultivos (estructuración y ejemplos) - Cultivo primario: células obtenidas directamente de tejido o explante. Alta capacidad proliferativa inicial pero limitada en número de pasajes. - Cultivo secundario / subcultivo: derivado del primario; se obtienen resiembras sucesivas. - Línea celular: población estable que mantiene características y puede subcultivarse múltiples veces; las líneas transformadas pueden volverse continuas (